將Ⅰ液滴加在已固定的涂片上，染1分鐘，用蒸餾水洗去剩余染料.滴加Ⅱ液,1分鐘后用蒸餾水洗去剩余染料.滴加Ⅲ液脫色，夏季30秒，冬季1分鐘，水洗.滴加Ⅳ液，復染1分鐘，用蒸餾水洗去剩余染料，待干后鏡檢。

 

結果：

 

  革蘭氏陽性細菌：藍色.革蘭氏陰性細菌：紅色。

 

貯存、有效期：

 

  本試劑盒應置2℃－25℃、相對濕度40－75%、避光環境保存，有效期一年。

 

巴氏染色液組成：

 

  結晶紫染色液（Ⅰ液）：　　　1×100ml；（規格一）；　  1×250ml（規格二）

  革蘭氏碘液（Ⅱ液）：　　　　1×100ml；（規格一）；　  1×250ml（規格二）

  95％酒精液（Ⅲ液）：　　　　1×100ml；（規格一）；　1  ×  250ml（規格二）

  沙黃染色液（Ⅳ液））：　　　 1×100ml；（規格一）；　  1×250ml（規格二）